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La α-amilasa (AMS) es una enzima que ayuda a digerir el glucógeno y el almidón. Se produce principalmente en las glándulas salivales y el páncreas exocrino. Su determinación se realiza principalmente para diagnosticar o controlar enfermedades del páncreas como pancreatitis crónica o aguda. Puede reflejar también enfermedad de la vesícula biliar, algunos problemas gastrointestinales y otros trastornos.

Almacenamiento: Conservar a 2-8ºC





PRINCIPIO DEL MÉTODO

La -amilasa hidroliza el 2-cloro-4-nitrofenil- -D-maltotriósido (CNPG3) a 2-cloro-4-nitrofenol (CNP) y forma 2-cloro-4-nitrofenil- -Dmaltoside (CNPG2), maltotriosa (G3) y glucosa (G), según la siguiente reacción: 10 CNPG3 Amilasa 9 CNP + 1 CNPG2 + G3 + G La velocidad de formación de 2-cloro-4-nitrofenol, determinado fotométricamente, es proporcional a la concentración catalítica de - amilasa en la muestra ensayada1.

SIGNIFICADO CLÍNICO

La -amilasa (AMS) es una enzima que ayuda a digerir el glucógeno y el almidón. Se produce principalmente en las glándulas salivales y el páncreas exocrino. Su determinación se realiza principalmente para diagnosticar o controlar enfermedades del páncreas como pancreatitis crónica o aguda. Puede reflejar también enfermedad de la vesícula biliar, algunos problemas gastrointestinales y otros trastornos2,5,6. El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.

CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD

Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, cuando se mantienen los frascos bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su contaminación. No usar reactivos fuera de la fecha indicada. Una vez abierto el reactivo es estable 60 días, si se cierra inmediatamente después de su uso y se conserva a 2-8ºC. Indicadores de deterioro de los reactivos: - Presencia de partículas y turbidez. - Absorbancia del Blanco a 405 nm 0,40.

MUESTRAS - Suero o plasma1 , separado lo antes posible de los hematíes. Como anticoagulante se recomienda la heparina. - Orina, ajustar el pH aproximadamente a 7,0 antes de conservar. Estabilidad: 1 mes a 2-8ºC.

PROCEDIMIENTO 1. Condiciones del ensayo:

Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 405 nm

Cubeta: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 cm paso de luz

Temperatura constante: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .37ºC 2.

Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.

3. Pipetear en una cubeta:

4. Mezclar, incubar 30 segundos.

5. Leer la absorbancia (A) inicial de la muestra, poner en marcha el cronometro y leer la absorbancia cada minuto durante 3 minutos.

6. Calcular el promedio de la diferencia de absorbancia por minuto ( A/min).

 

CÁLCULOS


Unidades: La unidad internacional (UI) es la cantidad de enzima que convierte 1 mol de substrato por minuto, en condiciones estándar. La concentración se expresa en unidades por litro (U/L).

Factor de conversión: U/L x 0,01667 = kat/L.

CONTROL DE CALIDAD

Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados: SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002120 y 1002210). Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, se debe revisar el instrumento, los reactivos y la técnica. Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias.

 

VALORES DE REFERENCIA

Suero o plasma Hasta 90 U/L de -amilasa Orina Hasta 450 U/L de -amilasa Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia.

CARACTERÍSTICAS DEL MÉTODO

Rango de medida: Desde el límite de detección 0,2439 U/L hasta el límite de linealidad 2200 U/L. Si la concentración de la muestra es superior al límite de linealidad, diluir 1/2 con NaCl 9 g/L y multiplicar el resultado final por 2.

Sensibilidad analítica: 1 U/L = 0,00025 A/min.

Exactitud: Los reactivos SPINREACT (y) no muestran diferencias sistemáticas significativas cuando se comparan con otros reactivos comerciales (x).

Los resultados obtenidos fueron los siguientes: Coeficiente de regresión (r) 2 : 0,98628. Ecuación de la recta de regresión: y=0,746x - 1,2697. Las características del método pueden variar según el analizador utilizado.

INTERFERENCIAS

La hemólisis interfiere en los resultados1 . La actividad -amilasa puede ser inhibida por agentes quelantes como citrato y EDTA. Se han descrito varias drogas y otras substancias que interfieren en la determinación de la -amilasa.

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